細胞培養(yǎng)室如何有效避免微生物交叉污染？ | 細胞房消毒是一項非常重要的任務，因為它可以預防細胞培養(yǎng)中的污染和交叉感染。細胞培養(yǎng)中常見的生物污染包括細菌芽孢霉菌支原體噬菌體污染等。對實驗室進行定期清潔、使用高效型消毒劑是避免細胞培養(yǎng)過程中由于實驗室環(huán)境引起細胞污染的主要措施
對于細胞培養(yǎng)，污染是最大的敵人，不管是設備、試劑亦或是環(huán)境造成的污染，這是每個養(yǎng)細胞的同志所頭疼的事情，我們先識別下污染的分類：
細菌芽孢污染
培養(yǎng)細胞受細菌污染后，會出現培養(yǎng)液變混濁，pH改變。污染后細胞發(fā)生病理改變，生長不良、胞內顆粒增多、增粗，最后變圓脫落死亡。以白色葡萄球菌較為常見。
真菌污染
培養(yǎng)細胞受真菌污染后，可見培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小點，有的散在生長，培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁；倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯在細胞之間或培養(yǎng)基中，有的呈鏈狀排列。真菌污染后，細胞生長變慢，但最后由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。
支原體污染
支原體是沒有細胞核結構的原核生物，多吸附于細胞表面或散在于細胞之間，可抑制細胞的代謝和成長，改變核酸合成、影響細胞的抗原性、導致染色體改變等。培養(yǎng)細胞受支原體污染后，由于支原體生長緩慢，開始不易發(fā)現。部分敏感細胞可見細胞生長增殖變慢，多數細胞污染后無明顯變化。若不及時處理，會產生交叉污染，又因常規(guī)培養(yǎng)基中預防細菌和霉菌的抗生素對它沒有作用，因此防治支原體的污染非常重要。
噬菌體污
噬菌體是一種寄生于細菌上的病毒，可以感染并破壞細菌。噬菌體污染會對實驗結果產生影響，影響實驗的可重復性和準確性。此外，噬菌體污染還可能導致實驗結果的誤解和實驗人員的健康威脅。
二細胞培養(yǎng)過程中環(huán)境污染途徑
1，取放細胞時引起的污染
細胞培養(yǎng)過程中，取放細胞是最基本的操作，培養(yǎng)房開關門的瞬間，環(huán)境中的微生物或多或少會進入培養(yǎng)箱中，而且內外溫差導致內門冷凝水的產生，極易吸附微生物，都是造成培養(yǎng)箱污染的風險因素。
2，滅菌不到位造成的二次污染
細胞培養(yǎng)過程中，因其它操作問題（如培養(yǎng)基潑灑，水盤污染等），造成培養(yǎng)房的大規(guī)模污染也時常會發(fā)生，此時就需要對培養(yǎng)箱進行滅菌消毒，常規(guī)的消毒（如紫外照射）只能達到表面消毒的效果，特別是對真菌等頑固性污染，無法進行有效滅菌，導致后續(xù)培養(yǎng)過程中細胞污染頻發(fā)。
三傳統(tǒng)消毒方式
在傳統(tǒng)的細胞房消毒方法中，常用紫外線、高溫、酒精等消毒方式。
01、紫外線消毒
紫外線消毒是通過紫外線殺死或去除微生物。
優(yōu)勢：適合無遮擋敞開型環(huán)境和空氣消毒，能夠在短時間內達到殺菌效果。使用成本相對較低，由于不投加化學藥劑，不會對水和環(huán)境產生影響。
缺點：殺菌效力較低，無法殺滅霉菌（孢子）、芽孢等高抗性微生物。一些被紫外線照射失活的細菌可形成“光復活"，另外一些細菌可能存在著“暗復活"現象。紫外線燈套容易結垢，需頻繁清洗以維持效果，另外紫外線存在老化問題，要求現場操作人員具備較高技術工藝，及時測定衰減程度并進行校正或更換，無法達到可控、可計量的消毒標準。紫外線不能直接照射人體，所以只能在無人情況下使用。受空間環(huán)境因素制約，所以通常作為一種輔助性消毒措施。
02、高溫消毒
高溫消毒是通過高溫殺死或去除微生物。高溫消毒有很多優(yōu)點，例如能夠殺死微生物的內部、不會產生化學殘留物等。但是，高溫消毒也有一些缺點。首先，高溫消毒需要使用高溫設備，這會增加成本。其次，高溫消毒需要一定的時間，因此需要進行計劃和安排。最后，高溫消毒可能會對一些細胞培養(yǎng)物造成損傷。
03、酒精擦拭消毒
酒精擦拭消毒是常見的一種消毒方法，但酒精易揮發(fā)，不穩(wěn)定。只能用于物體表面消毒，其消毒主要針對普通細菌，對高抗性的芽孢、霉菌等無效。
70%-75%乙醇優(yōu)勢是對細菌具有較好的殺滅作用，但對真菌的效力有限，可以使用奧克泰士來解決乙醇無法較好解決的酵母、霉菌、芽孢的污染問題。
對于細胞培養(yǎng)實驗室來說，最重要的是杜絕一切可能的污染源。
四如何有效避免污染
1.重視細胞房管理工作，規(guī)范操作
定期進行細胞房清潔消毒工作，規(guī)范實驗人員操作（如身著白大褂、換鞋等），創(chuàng)造潔凈培養(yǎng)環(huán)境。
2.避免頻繁查看細胞
做好實驗規(guī)劃，減少培養(yǎng)箱門開關的頻率，取放細胞時需佩戴潔凈的手套，并用少量的 70% 醫(yī)用酒精（過多會導致培養(yǎng)箱中殘留乙醇蒸汽）擦拭培養(yǎng)瓶/皿表面，從而降低細胞培養(yǎng)箱污染的風險；
3.定期維護和滅菌，預防污染
定期清潔維護，培養(yǎng)箱內用水滅菌后使用并定期更換，選擇培養(yǎng)箱時，可優(yōu)先考慮有自動滅菌功能的培養(yǎng)箱。細胞房一旦發(fā)生污染，及時進行消毒滅菌工作。
奧克泰士高效型殺孢子劑，滿足潔凈區(qū)和實驗室的苛刻滅菌要求：
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