關(guān)鍵詞:菌種復(fù)壯 純種分離 宿主復(fù)壯 病毒 寄生微生物 誘變 基因突變 淘汰 菌絲頂端分離 培養(yǎng)基 無(wú)菌操作
菌種復(fù)壯指通過淘汰衰老、死亡、變異的細(xì)胞來挑選具有優(yōu)良性狀的細(xì)胞,以此來恢復(fù)菌種原有優(yōu)良性狀和活力的過程。常用方法有純種分離法、宿主復(fù)壯法、誘變法、淘汰法等。針對(duì)不同類型的菌種和復(fù)壯目的,可以采用多種方法。
一、純種分離法
純種分離法是目前應(yīng)用廣泛的菌種復(fù)壯方法之一,通過挑取單個(gè)性狀優(yōu)良的菌落并進(jìn)行多次分離培養(yǎng),以去除混雜在菌種中的衰老、死亡和變異的細(xì)胞,從而篩選出具有優(yōu)良性狀的菌種,以達(dá)到復(fù)壯的目的。
操作步驟如下:
1.準(zhǔn)備:無(wú)菌環(huán)境下,在超凈工作臺(tái)上用無(wú)菌接種針或接種環(huán)從需要復(fù)壯的菌種中挑取一個(gè)性狀優(yōu)良的單菌落。
2.分離:在準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿上劃線分離,注意劃線手法,確保成熟后的菌落便于后續(xù)挑選。操作結(jié)束后將培養(yǎng)皿放在適宜的環(huán)境中培養(yǎng)。
3.挑選:待菌落生長(zhǎng)成熟后,于超凈工作臺(tái)上挑選外觀、顏色、形態(tài)優(yōu)良的菌落,進(jìn)行下一次劃線分離。
4.重復(fù)操作:重復(fù)數(shù)次上述操作至分離出性狀優(yōu)良的純種菌落。
此外,純種分離法還包括稀釋平板法、涂布平板法等多種方式,可以根據(jù)菌種特性和實(shí)驗(yàn)條件選擇適合的方法來達(dá)到復(fù)壯菌種的目的。
圖示為劃線分離法
二、宿主復(fù)壯法
宿主復(fù)壯法適用于病毒、立克次氏體等細(xì)胞內(nèi)寄生的微生物。通過將待復(fù)壯的菌種接種到昆蟲或植物的宿主細(xì)胞內(nèi),利用宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜的代謝環(huán)境,提高菌種的活力,從而達(dá)到復(fù)壯的目的。
操作步驟如下:
1.準(zhǔn)備:準(zhǔn)備昆蟲或植物的宿主細(xì)胞,在無(wú)菌條件下將宿主細(xì)胞接種到適宜的培養(yǎng)基上。
2.寄生:將病毒等需要復(fù)壯的微生物接種到宿主細(xì)胞內(nèi),使其寄生并感染宿主細(xì)胞。
3.挑選:培養(yǎng)一段時(shí)間后,觀察宿主細(xì)胞的病變程度,從病變程度嚴(yán)重或已病死的宿主細(xì)胞內(nèi)分離出典型菌株再次感染健康的宿主細(xì)胞。
4. 重復(fù)操作:重復(fù)上述操作至菌種活力得到提高。
圖示為病毒寄生宿主細(xì)胞
三、誘變法
通過物理或化學(xué)因素使菌種發(fā)生基因突變,從而篩選出具有優(yōu)良性狀的菌株。誘變法存在一定的風(fēng)險(xiǎn),可能會(huì)導(dǎo)致菌種發(fā)生不可逆的突變,使用時(shí)需注意誘變劑的劑量或輻射時(shí)間。
操作步驟如下:
1.準(zhǔn)備:準(zhǔn)備好需要復(fù)壯的菌種培養(yǎng)基,選擇合適的誘變劑,如紫外線、抗生素等。
2.誘變:使用誘變劑處理培養(yǎng)基,使菌種發(fā)生基因突變。
3.挑選:將培養(yǎng)基放在適宜的環(huán)境中至培養(yǎng)結(jié)束,無(wú)菌環(huán)境下挑選出具有優(yōu)良性狀的突變株進(jìn)行復(fù)壯。
圖示為用紫外線處理培養(yǎng)皿
四、淘汰法
淘汰法通過對(duì)衰退的菌種進(jìn)行處理,如高溫、低溫的培養(yǎng)環(huán)境,低營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)基等,淘汰菌種中的衰老、死亡和變異的細(xì)胞,從而篩選出適應(yīng)力強(qiáng)、有活力的細(xì)胞。淘汰法可以有效去除衰退個(gè)體,增強(qiáng)菌種的優(yōu)良性狀。
操作步驟如下:
1.準(zhǔn)備:無(wú)菌環(huán)境下,將待復(fù)壯的菌種接種到低營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)基上,或接種到正常的培養(yǎng)基上放在高溫或低溫環(huán)境中培養(yǎng)。
2.挑選:培養(yǎng)周期結(jié)束后,在超凈工作臺(tái)上挑選出適應(yīng)力強(qiáng)、有活力的菌落進(jìn)行下一步的復(fù)壯操作。
圖示為通過調(diào)節(jié)溫度改變培養(yǎng)環(huán)境
五、其他方法
1.菌絲頂端分離:無(wú)菌環(huán)境下挑取健壯菌絲體的頂端部分進(jìn)行純化培養(yǎng),以恢復(fù)菌種原有的優(yōu)良性狀。此方法適用于不產(chǎn)孢子的絲狀菌。
2.適當(dāng)更換培養(yǎng)基:在菌種傳代培養(yǎng)中適當(dāng)改變培養(yǎng)基成分,以刺激菌絲生長(zhǎng),提高菌種活力。
3.定期進(jìn)行菌種分離:對(duì)生產(chǎn)中應(yīng)用的菌種每1-2年進(jìn)行一次分離復(fù)壯,以保持菌種的優(yōu)良性狀和活力。
六、注意事項(xiàng)
1.復(fù)壯前需對(duì)菌種進(jìn)行鑒定,保證菌種的純度。
2.復(fù)壯操作過程中要注意無(wú)菌操作,避免培養(yǎng)基或菌種被雜菌污染,保證菌種正常生長(zhǎng)。
3.應(yīng)對(duì)復(fù)壯后的菌種進(jìn)行性能評(píng)價(jià),確保其具有穩(wěn)定的優(yōu)良性狀。
綜上所述,菌種復(fù)壯是一個(gè)綜合性的過程,需要根據(jù)具體情況選擇合適的方法并按操作規(guī)范嚴(yán)格執(zhí)行。通過菌種復(fù)壯,可以恢復(fù)菌種原有的生命活力,提高菌種的生長(zhǎng)和代謝速度,為發(fā)酵生產(chǎn)、科學(xué)研究等提供具有優(yōu)良性狀的菌種。